蛋白质重组表达通常会融合蛋白或多肽标签以便于重组蛋白的表达，示踪和纯化等，常见标签有His*6，GST，Strep，Fc，MBP，Flag和组合式双标签或多标签。

GST，MBP，Fc等蛋白标签由于分子量较大，通常需要酶切去除，以消除其对目标蛋白的结构与功能的影响；多肽标签分子量较小，免疫原性较低，基本不影响蛋白质的结构和功能，通常可以不用酶切去除，但用于结构生物学或其他较高级研究的蛋白通常也要将小分子量多肽标签酶切去除，以达到最佳效果。

去除标签的关键在于选择合适的蛋白酶并构建相应的氨基酸识别序列。常用的蛋白酶及对应的酶切位点如下表：

(资料图片)

下面我们对五种常见的蛋白内切酶做个简单介绍

01

SUMO protease: 又叫Ulp，是重组表达的酿酒酵母ULP1(Ubl-specific protease 1)片段，它能够特异性识别SUMO融合蛋白的空间结构而不是的氨基酸序列。SUMO protease优点有：特异性好（无非特异切割），活性高，酶切条件温和，缓冲液耐受好等特点，可以各种常见缓冲液体系中高效切除SUMO融合蛋白。由于SUMO标签具有极佳的促溶和促表达交效果，SUMO标签与SUMO protease是重组蛋白表达中最常见融合蛋白标签与蛋白内切酶的组合。

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图1. SUMO protease结合SUMO标签

图2. SUMO protease切割目标蛋白

02

HRV 3C Protease：重组表达的人源3C Protease，是一种半胱氨酸蛋白酶，能特异识别氨基酸序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln↓Gly-Pro，并在谷氨酰胺(Gln)和甘氨酸(Gly)之间切开。普健生物的HRV 3C Protease经过严格的测试，具有酶活高，可在不同pH，不同温度，含咪唑的条件下识别并切割目标序列。

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图3. HRV 3C Protease切割目标蛋白

03

Enterokinase：肠激酶是一种丝氨酸蛋白水解酶，能高效专一地识别蛋白质中Asp-Asp-Asp-Asp-Lys↓(DDDDK↓)序列，并在赖氨酸(Lys, K)的C端水解肽键。普健生物的重组表达的肠激酶具有极高的酶切活性。肠激酶的最大优势在于当识别序列融合在蛋白标签的C端时，可以达到酶切后无氨基酸残留，深受科研工作者喜爱；然而肠激酶的酶切条件要求比较苛刻，需在无盐离子，室温或37度温育时才能发挥最高活性，对于盐浓度敏感或温度敏感的蛋白酶切时容易发生沉淀。普健生物积累了一套应对肠激酶酶切蛋白发生沉淀的应对策略，欢迎大家留言咨询。

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图4. Enterokinase切割目标蛋白

04

TEV protease：是一种重组表达的半胱氨酸蛋白酶，能特异性地识别七肽序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓Gly/Ser，并在Gln和Gly/Ser氨基酸残基之间进行酶切。TEV Protease的最佳酶切温度是30℃，在4℃时也保留了一定的活性，为尽可能保留目标蛋白活性，在实际操作中常用4℃过夜酶切。

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Thrombin：凝血酶来源于牛血浆，分子量37 kD，是由两条肽链(31 kD和6 kD)通过二硫键组成的。37℃时, 凝血酶活性很高，温度降低活性也随之降低，在4℃时基本无酶切活性，所以实验室使用凝血酶切割目标蛋白时常采用室温酶切或37℃水浴酶切。但热不稳定蛋白在室温或37℃水浴酶切过程中很有可能会发生失活或者沉淀，且凝血酶为牛血浆分离提取，纯度低，需要用苯甲脒琼脂糖才能将酶从蛋白样品中去除，故并不推荐使用。普健生物积累了丰富的经验来解决凝血酶酶切过程中目标蛋白受热沉淀的难题，欢迎大家留言咨询。

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今天给大家分享了五种常用蛋白酶的特点及使用条件，希望对您今后的科研工作有所帮助。

用什么酶可以把抗体切成F(ab)2和Fc？大家第一时间想到的肯定是胃蛋白酶。但是胃蛋白的酶对抗体的切割要在极端的酸性条件下完成，且切割位点并不专一，酶切时间短了，大部分抗体未被切开，酶切时间长了，又会发生非特异切割。为了切一个抗体，要药费大量时间来摸索酶浓度梯度和酶切时间梯度。我们将推出抗体酶切篇来帮您节约宝贵时间，轻松搞定抗体酶切，敬请关注。